無菌工藝

       在我們工藝驗證與再驗證過程中，經(jīng)以常會提到的一詞就是模擬工藝過程中有可能出現(xiàn)最差條件，也就是說平時我們在最優(yōu)的條件下生產(chǎn)，但在驗證時要考慮在最差的條件下考察我們工藝的耐用性，考驗在最差的條件下，工藝控制是否依然有效，從而證明正常生產(chǎn)條件下，工藝控制是更加可靠的。最差條件就是在我們工藝的邊緣進行試探，而不需要超出邊界。

       在無菌工藝驗證時，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)的要求是工藝控制方式要定期進行考察，正常生產(chǎn)條件下每半年應(yīng)進行一次培養(yǎng)基模擬驗證。使用含營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基代替產(chǎn)品來進行無菌生產(chǎn)。工藝模擬的策略足以評估在實際的操作過程中工藝、環(huán)境、設(shè)備以及潔凈室操作人員對藥物產(chǎn)品潛在的污染性。

       以我單位無菌生產(chǎn)工藝模擬為例，首先是洗瓶崗位，洗瓶機清洗西林瓶需要經(jīng)過七個步驟。每個清洗步驟都裝有噴針裝置，能夠?qū)⑶逑此訅?，對西林瓶的?nèi)部實行高壓沖洗，保證清潔效果，清洗水和壓縮空氣在到達設(shè)備使用點前，要經(jīng)過終端過濾后保證可見異物得到有效阻隔，并且所有清潔用水，飲用水、純化水、注射用水不允許重復(fù)使用。

       西林瓶清洗結(jié)束后，自動地傳送至隧道烘箱。隧道烘箱通過干熱滅菌350℃對清洗過的西林瓶進行滅菌及去熱原。西林瓶自動地進入滅菌隧道后，將經(jīng)過如下三個工藝區(qū)：預(yù)熱段、加熱段、冷卻段。離開隧道烘箱后，西林瓶進入到分裝機的進瓶轉(zhuǎn)盤上傳送至分裝機。

       分裝機用于把藥液分裝至西林瓶中。無菌藥液由分裝機的不銹鋼藥液桶供給。計量器將精確計量的藥液裝入西林瓶中。隨后膠塞壓入西林瓶。已滅菌的膠塞通過料斗進入到壓膠塞振蕩器。

       半壓塞的膠塞進入凍干機進行冷凍干燥。干燥后再進行全壓塞。壓塞后西林瓶通過輸送帶傳至壓蓋機進行壓蓋密封。最后中間產(chǎn)品通過目測檢查后進行最終包裝。

       風(fēng)險分析：

       模擬介質(zhì)的選擇，針對不同的微生物應(yīng)選擇不同的培養(yǎng)基，比如硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基適用于需氧菌和厭氧菌，胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基適用于需氧菌和真菌。

       因為無菌藥品的生產(chǎn)都和空氣接觸，污染厭氧菌的幾率很小，而且被污染的微生物大多數(shù)為需氧菌或真菌。根據(jù)無菌水針制劑的生產(chǎn)工藝和生產(chǎn)環(huán)境選擇，應(yīng)選用適用于大多數(shù)微生物生長的培養(yǎng)基。另外，當(dāng)產(chǎn)品無菌檢測中發(fā)現(xiàn)厭氧菌時，考慮選擇硫乙醇酸鹽培養(yǎng)基。

       在培養(yǎng)基模擬灌裝試驗中事先不知道系統(tǒng)中存在什么樣的微生物，但分別選擇多種培養(yǎng)基分別做無菌測試也較難做到。

       胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基粉具備以下條件：沒有抑菌作用；適應(yīng)大多數(shù)細菌的生長；對設(shè)備沒有腐蝕性，對人體無害，對環(huán)境不發(fā)生污染。

       基于以上分析，根據(jù)產(chǎn)品分裝工藝對培養(yǎng)基的選擇適用性、澄清度、濃度和滅菌的適用性的比較之下，確定無菌生產(chǎn)工藝模擬選用的模擬介質(zhì)為胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基（或其它）。

       試驗的結(jié)果受模擬介質(zhì)無菌性的影響很大，若不能保證它的無菌性，或在試驗之前受到了污染，則不能保證試驗結(jié)果的可信性。模擬介質(zhì)在使用之前應(yīng)滅菌。滅菌的方法很多，如γ射線滅菌，濕熱滅菌，過濾除菌等?；诮?jīng)驗選用便捷安全有效的γ射線滅菌法。

       根據(jù)胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基粉的微生物負載確定γ射線的劑量，滅菌后進行無菌性測試和靈敏度測試。

       包裝材料的選擇：西林瓶類型和尺寸的選擇，正常生產(chǎn)中使用的西林瓶類型和尺寸如下：

       以上表格顯示，對模制瓶進行去熱源需要較高的溫度和較長的時間。因此，為模擬最惡劣條件，西林瓶的類型選用模制瓶。

       15ml高硼硅玻璃模制注射劑瓶模制瓶的瓶口相比較大。較大的瓶口暴露的空間較大，從而產(chǎn)品染菌的風(fēng)險越高。因此，為模擬最惡劣條件，選擇最大瓶口尺寸的15ml中性硼硅玻璃模制注射劑瓶進行模擬分裝。

       膠塞的選擇 ，常生產(chǎn)中使用的注射用無菌水針用鹵化丁基橡膠塞類型和尺寸如下：

       較細的塞柱直徑與瓶子密封縫隙較大，從而產(chǎn)品染菌的風(fēng)險越高。因此，為模擬最惡劣條件，選擇最小塞柱直徑尺寸鹵化丁基橡膠塞進行模擬分裝。鋁蓋類型和尺寸的選擇，正常生產(chǎn)中使用的鋁蓋只有一種：抗生素用鋁塑復(fù)合蓋。

       惰性氣體，充氮產(chǎn)品的無菌工藝模擬應(yīng)進行充氮模擬。灌裝樣品應(yīng)包括不低于20%（開始時10%，結(jié)束時10%）充氮氣的樣品，其余灌裝樣品使用無菌空氣代替氮氣。

       分裝機速度的選擇，根據(jù)西林瓶的不同規(guī)格，分裝機的正常分裝速度為70~300瓶/min。已通過分裝機確認(rèn)證明在300瓶/min高車速時運轉(zhuǎn)穩(wěn)定，而分裝機的分裝速度越低，產(chǎn)品暴露的時間越長，從而產(chǎn)品染菌的風(fēng)險越高。因此，為模擬最惡劣條件，分裝機的分裝速度選擇為最低速，即70瓶/min。

       注射用水灌裝量的選擇 ，溶液體積需足以涂在容器的內(nèi)表面，且不少于總?cè)莘e的1/3（即5ml）。本次灌裝體積選擇為10ml，考慮裝量誤差±1ml，注射用水裝量應(yīng)10±1ml。

       無菌培養(yǎng)基灌裝量的選擇，根據(jù)胰酪胨大豆肉湯培養(yǎng)基使用說明，濃度配比為3%（g/ml），所以標(biāo)準(zhǔn)裝量定為0.3g，考慮分裝設(shè)備可控制的裝量范圍確定裝量范圍為±14%。

       灌裝西林瓶數(shù)量的選擇，每班工作時間為12小時。除去模擬干擾時間（約xxx小時）和注射用水罐的組裝時間（約2小時），分裝的時間約為xxx小時。

       因此，灌裝西林瓶的理論數(shù)量為：

       Xxx小時x 60 min/h x 70 vials/min = xxx

       考慮到在實際工藝模擬測試中的不可預(yù)見性，灌裝西林瓶的數(shù)量應(yīng)不少于xxx。

       人員數(shù)量的選擇，所有被授權(quán)在生產(chǎn)時進入關(guān)鍵區(qū)域分裝間的人員，包括生產(chǎn)操作人員、輔助人員、取樣人員以及維修人員，本次灌裝時確保其按照常規(guī)生產(chǎn)的職責(zé)模擬與其相關(guān)的動作。正常生產(chǎn)時分裝室操作人員2人。本次灌裝時確保操作人員數(shù)量為規(guī)程中規(guī)定的最多人數(shù)4人。

       環(huán)境條件及監(jiān)測，模擬灌裝時的環(huán)境條件與實際生產(chǎn)操作條件一致，并按照日常環(huán)境監(jiān)測要求進行環(huán)境監(jiān)測。

       運行持續(xù)時間，不少于一個完整產(chǎn)品批的實際生產(chǎn)操作時間。保存時間，在準(zhǔn)備階段將物料、灌裝部件和待灌裝的小瓶按照工藝要求在無菌條件下保存到被允許的最長時間，設(shè)備清潔消毒、潔凈區(qū)域清潔消毒后、的保持時間大于按照工藝要求的最長保持時間。

       干擾設(shè)計：

       培養(yǎng)基模擬灌裝試驗應(yīng)當(dāng)盡可能模擬常規(guī)的無菌生產(chǎn)工藝，包括所有對無菌結(jié)果有影響的關(guān)鍵操作，及生產(chǎn)中可能出現(xiàn)的各種干預(yù)和最差條件。以使各種不同的生產(chǎn)實踐（應(yīng)盡可能模擬到極有可能發(fā)生的中斷或干擾，包括倒瓶、取樣、進餐休息、故障維修）被模擬。干擾動作的次數(shù)應(yīng)不少于實際生產(chǎn)可能發(fā)生的最多次數(shù)。

       結(jié)論，無菌生產(chǎn)工藝模擬條件的設(shè)計要考慮無菌生產(chǎn)工藝，進行了模擬介質(zhì)、包裝材料（西林瓶、膠塞、鋁蓋）、惰性氣體、分裝機速度、注射用水及無菌培養(yǎng)基的裝量、灌裝數(shù)量、人員數(shù)量、環(huán)境條件及監(jiān)測、運行持續(xù)時間、保存時間各方面條件的確定，模擬條件設(shè)計的策略要足以評估在實際的操作過程中工藝、環(huán)境、設(shè)備以及潔凈室操作人員對藥物產(chǎn)品潛在的污染性。

       在每半年的無菌生產(chǎn)工藝模擬前會對上一階段的生產(chǎn)狀況進行總結(jié)和趨勢分析，綜合考慮再次設(shè)計有代表性的干擾類型及次數(shù)。