流感是一種由甲型和乙型流感病毒引起的急性高度傳染性呼吸道疾病。每年流感流行都是由幾種不同的季節(jié)性流感病毒（即A/H1N1, A/H3N2, B/Yamagata, and B/Victoria）引起的。流感給人類的健康帶來(lái)了沉重負(fù)擔(dān)：世界衛(wèi)生組織（WHO）估計(jì)，每年流感導(dǎo)致全球300萬(wàn)至500萬(wàn)例嚴(yán)重疾病，其中29萬(wàn)至65萬(wàn)人死亡。

       目前，各種疫苗和抗病毒藥物被用于預(yù)防和治療流感。然而，目前的流感疫苗對(duì)感染的有效性可能并不理想。其中一個(gè)原因是，目前的季節(jié)性流感疫苗是在下一個(gè)流感季節(jié)開(kāi)始前幾個(gè)月生產(chǎn)的，因此，疫苗株的抗原性可能與下一個(gè)季節(jié)流行的優(yōu)勢(shì)株的抗原性不完全匹配。此外，老年人通常表現(xiàn)出較低的免疫反應(yīng)和疫苗對(duì)感染的有效性。

       流感疫苗的免疫原性可以通過(guò)添加佐劑來(lái)提高。理想的佐劑可以提高疫苗的效力，并具有很好的安全性。最近，一種含有水包油佐劑MF59的流感疫苗FLUAD在美國(guó)和其他國(guó)家獲得了65歲及以上人群的許可。新佐劑流感疫苗可能代表了未來(lái)應(yīng)對(duì)流感大流行的未來(lái)方向。

       目前已獲批的流感疫苗

       目前，有三種獲得批準(zhǔn)的季節(jié)性流感疫苗可供人類使用：滅活疫苗、減毒活疫苗和重組血凝素疫苗。這些疫苗由三種或四種不同類型的流感病毒組成，世界衛(wèi)生組織每年對(duì)其進(jìn)行更新，以反映最新的流行毒株。目前的流感疫苗通常是三價(jià)或四價(jià)的，含有兩種甲型流感毒株（即A/H1N1和A/H3N2）和一種或兩種預(yù)計(jì)在下一個(gè)季節(jié)傳播的乙型流感病毒。已經(jīng)開(kāi)發(fā)出各種類型的流感疫苗，批準(zhǔn)的疫苗如下表所示。

       滅活疫苗

       流感滅活疫苗有三種：全病毒顆粒疫苗、裂解病毒疫苗和亞單位疫苗。20世紀(jì)40年代開(kāi)發(fā)的滅活全病毒顆粒疫苗由缺乏傳染性但保持病毒顆粒形狀的病毒顆粒組成，包括病毒基因組RNA和所有病毒結(jié)構(gòu)蛋白。滅活的全病毒顆粒疫苗可有效誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)。全病毒顆粒滅活疫苗保留了進(jìn)入靶細(xì)胞的能力但不增殖，然而由于病毒顆粒的脂質(zhì)成分，人們擔(dān)心其熱原性和不良反應(yīng)。

       因此，這種疫苗被裂解病毒疫苗取代，裂解病毒疫苗是通過(guò)用乙 醚或洗滌劑處理純化的病毒以去除病毒包膜制備的。亞單位疫苗主要包括HA和神經(jīng)氨酸酶蛋白。裂解和亞單位疫苗可誘導(dǎo)先前感染過(guò)流感病毒的人產(chǎn)生免疫力；然而，它們不能在從未感染過(guò)的嬰兒中誘導(dǎo)足夠的免疫力。這是因?yàn)榱呀庖呙缡チ舜蟛糠植《締捂淩NA，并且由于缺乏對(duì)先天免疫受體的信號(hào)傳導(dǎo)而降低了免疫原性。

       減毒活疫苗

       減毒流感活疫苗（LAIV）是基于低溫下在胚胎雞蛋中連續(xù)傳代產(chǎn)生的冷適應(yīng)、溫度敏感和減毒變體。例如，F(xiàn)luMist®是一種減毒流感活疫苗，用于2至49歲的健康人群。病毒具有來(lái)自循環(huán)病毒的表面糖蛋白，而其內(nèi)部基因來(lái)自冷適應(yīng)的主供體病毒。因此，在鼻內(nèi)接種這些疫苗后，它們的復(fù)制僅限于上呼吸道，那里的溫度低于正常體溫。與自然感染類似，減毒活疫苗在上呼吸道誘導(dǎo)粘膜IgA反應(yīng)和交叉反應(yīng)性T細(xì)胞反應(yīng)。病毒復(fù)制過(guò)程中產(chǎn)生的雙鏈病毒RNA被內(nèi)體先天免疫受體TLR3和視黃酸誘導(dǎo)基因（RIG-I）識(shí)別，導(dǎo)致干擾素介導(dǎo)的抗病毒反應(yīng)和促炎細(xì)胞因子反應(yīng)的誘導(dǎo)。

       重組HA疫苗

       重組HA疫苗含有通過(guò)使用桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)在昆蟲(chóng)細(xì)胞中產(chǎn)生的純化HA。Flublok®四價(jià)疫苗是一種重組流感疫苗，分別于2017年和2020年在美國(guó)和歐盟批準(zhǔn)用于18歲及以上人群。自2020-2021年流感季節(jié)以來(lái)，該疫苗已在美國(guó)和歐盟某些國(guó)家上市。接種Flublok®疫苗的人患流感的概率比接種普通滅活流感疫苗的人低30%，這很可能是因?yàn)橹亟MHA疫苗含有三倍量的HA蛋白。在Flublok®生產(chǎn)過(guò)程中，不需要種子病毒和雞胚，因此重組疫苗的生產(chǎn)速度比基于雞胚或細(xì)胞的疫苗更快。

       有效性

       流感病毒由于抗原漂移而不斷變化，很難預(yù)測(cè)下一季流行的病毒。如果疫苗株和流行株的抗原性不匹配，則流感疫苗對(duì)感染的有效性降低。世界衛(wèi)生組織通過(guò)考慮世界各地的流行情況來(lái)選擇疫苗株；然而，在一些情況下，抗原性不匹配，導(dǎo)致疫苗對(duì)感染的有效性不理想。高劑量疫苗（如Fluzone高劑量）和含佐劑的疫苗（如FLUAD®）已被開(kāi)發(fā)為更有效的疫苗。這些疫苗顯示出良好前景，具有比傳統(tǒng)疫苗更高的保護(hù)率。

       用于流感疫苗的佐劑

       提高疫苗抗感染效力的最有效策略之一是添加佐劑。就流感疫苗而言，佐劑可有效增強(qiáng)免疫原性，并減少保護(hù)所需的病毒抗原量和所需的疫苗接種次數(shù)。此外，佐劑可以擴(kuò)大對(duì)抗原變體的反應(yīng)性，并有效對(duì)抗疫苗株和循環(huán)病毒之間的抗原錯(cuò)配。許多佐劑已被批準(zhǔn)用于流感疫苗，包括鋁佐劑、MF59、AS03、AF03和病毒體。

       鋁佐劑

       鋁佐劑，包括氫氧化鋁、磷酸鋁和硫酸鋁鉀，是最常見(jiàn)的佐劑，自20世紀(jì)30年代以來(lái)一直用于疫苗。在含有鋁佐劑的百白破疫苗被成功證明能在人類中引發(fā)保護(hù)性免疫后，人們也開(kāi)發(fā)了一種與鋁佐劑聯(lián)合的流感疫苗；然而，它沒(méi)有表現(xiàn)出足夠的免疫反應(yīng)。直到MF59的開(kāi)發(fā)，流感疫苗佐劑的研究才取得重大進(jìn)展。

       MF59

       MF59由角鯊烯水包油乳液組成，用兩種表面活性劑（聚山梨醇酯80和山梨醇三油酸酯）乳化。MF59誘導(dǎo)Th1和Th2型免疫反應(yīng)以及一些特定細(xì)胞因子/趨化因子的釋放，如IFN-γ、CCL2、CCL3、IL-8和IL-5。MF59被用于季節(jié)性流感疫苗FLUAD，甚至在老年人中也能增強(qiáng)免疫反應(yīng)。FLUAD于1997年在意大利首次獲得批準(zhǔn)，隨后于2015年在美國(guó)和歐洲獲得批準(zhǔn)，用于65歲及以上人群。此外，F(xiàn)LUAD四價(jià)流感疫苗也已被批準(zhǔn)用于該老年人群，并在美國(guó)2020-2021年季節(jié)上市。與未添加佐劑的疫苗相比，MF59佐劑季節(jié)性流感疫苗在老年人和兒童中引發(fā)更強(qiáng)的免疫反應(yīng)。

       AS03

       AS03是一種由角鯊烯、DL-α-生育酚和聚山梨醇酯80組成的佐劑，用作甲型H1N1 pdm09和H5N1禽流感病毒的疫苗。AS03觸發(fā)短暫的NF-κB依賴性先天免疫反應(yīng)，導(dǎo)致在注射部位和引流淋巴結(jié)產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子，包括CCL2、CCL3、IL-6、CSF3和CXCL1，從而誘導(dǎo)免疫細(xì)胞遷移。AS03佐劑A（H1N1）pdm09疫苗在老年人中比非佐劑疫苗誘導(dǎo)更高的抗體反應(yīng)。

       AF03

       AF03是一種水包油佐劑，用于甲型H1N1流感病毒 裂解疫苗Humenza，但從未上市。盡管AF03已被報(bào)道在動(dòng)物模型中增強(qiáng)體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，但其機(jī)制仍在很大程度上不清楚。

       病毒體

       病毒體表面有流感抗原，模仿病毒，可以被認(rèn)為是一種病毒樣顆粒（VLP）。通過(guò)模仿病毒，病毒體可以將抗原帶入抗原呈遞細(xì)胞，并在淋巴系統(tǒng)中運(yùn)輸。Inflexal® V是一種三價(jià)病毒體疫苗，含有來(lái)自世界衛(wèi)生組織推薦的疫苗株的HA和NA。1997年在瑞士獲得批準(zhǔn)后，它被引入了世界各地，但現(xiàn)在已經(jīng)不復(fù)存在。它在健康和免疫功能受損的老年人、成年人和兒童中誘導(dǎo)強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，類似于自然病毒感染。

       與佐劑疫苗相關(guān)的不良反應(yīng)

       流感疫苗需要足夠有效；然而，也必須考慮副作用。在大流行性H1N1流感疫苗中提出了關(guān)于水包油佐劑AS03的安全性問(wèn)題。報(bào)告了該疫苗的局部和全身不良反應(yīng)，盡管影響并不嚴(yán)重。在一些國(guó)家，AS03佐劑疫苗與兒童發(fā)作性睡病發(fā)病率增加有關(guān)。然而，最近的研究表明，發(fā)作性睡病的誘因可能是大流行性H1N1流感病毒的病毒蛋白，而不是佐劑AS03。1型嗜睡癥是由下丘腦視網(wǎng)膜神經(jīng)元的自身免疫破壞引起的。由于下視蛋白和病毒抗原肽之間的分子模擬，識(shí)別下視蛋白肽的局部CD4+T細(xì)胞反應(yīng)可能受到流感病毒抗原的刺激，導(dǎo)致靶向下視蛋白神經(jīng)元的交叉反應(yīng)性自身免疫反應(yīng)。

       MF59和鋁佐劑在H5N1禽流感病毒重組裂解疫苗中的抗體反應(yīng)已在臨床試驗(yàn)中進(jìn)行了評(píng)估。與鋁佐劑相比，MF59增加了對(duì)病毒的中和抗體反應(yīng)。未觀察到疫苗接種引起的嚴(yán)重不良反應(yīng)。鋁佐劑組和MF59佐劑組之間的全身反應(yīng)（如發(fā)燒、不適和頭痛）沒(méi)有差異。

       流感疫苗佐劑的新進(jìn)展

       皂苷

       盡管鋁佐劑在疫苗中使用已有很長(zhǎng)時(shí)間，但這種佐劑誘導(dǎo)體液免疫，而不是細(xì)胞免疫。基于皂苷的佐劑已存在于獸醫(yī)用疫苗中，可誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫。Quil A及其衍生物QS-21已被評(píng)估用于人類流感疫苗佐劑，但使用這些佐劑的疫苗與不使用的疫苗在誘導(dǎo)免疫方面沒(méi)有明顯的優(yōu)勢(shì)。

       2013年H7N9禽流感病毒出現(xiàn)后，來(lái)自Novavax的研究人員宣布，他們的H7N9疫苗臨床試驗(yàn)成功。他們?cè)贖7N9 VLP疫苗中添加了基于皂苷的ISCOMATRIX佐劑，盡管H7病毒被認(rèn)為具有較低的免疫原性，但添加皂素佐劑比鋁佐劑或無(wú)佐劑誘導(dǎo)的免疫原率更高。

       Matrix M是另一種基于皂苷的佐劑，已在1期臨床試驗(yàn)中作為病毒體H5N1流感疫苗的佐劑進(jìn)行了評(píng)估。用于季節(jié)性流感的Matrix M佐劑四價(jià)納米顆粒疫苗也在3期隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)中進(jìn)行了評(píng)估。與獲得許可的四價(jià)滅活流感疫苗相比，該疫苗在65歲以上的老年人中引發(fā)了更高的體液和細(xì)胞免疫。與單獨(dú)的疫苗相比，Matrix M僅需要更少的抗原來(lái)誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。

       TLR激動(dòng)劑

       Poly I:C是一種合成的TLR3激動(dòng)劑，具有類似dsRNA的結(jié)構(gòu)。Poly I:C12U已被測(cè)試用于鼻流感疫苗的佐劑，據(jù)報(bào)道顯示出高粘膜免疫原性。此外，Rintatolimod與季節(jié)性流感疫苗聯(lián)合使用可誘導(dǎo)針對(duì)其他亞型流感的交叉反應(yīng)性IgA。PIKA也是一種穩(wěn)定的dsRNA，在動(dòng)物研究中，通過(guò)皮下注射和鼻內(nèi)免疫，已被證明在H1、H3和H5亞型流感病毒的疫苗中作為佐劑是有效的。

       吡喃葡萄糖基脂質(zhì)A（GLA）是TLR4配體，也被應(yīng)用于為佐劑。在2期研究中評(píng)估了GLA佐劑H5N1流感病毒疫苗與鋁佐劑疫苗的HI抗體滴度，結(jié)果顯示：用GLA佐劑免疫的人群比用鋁佐劑免疫的人群具有更高的HI抗體滴度，并且需要更少的抗原。

       鞭毛蛋白是細(xì)菌鞭毛的主要成分，也是TLR5配體，已被檢測(cè)應(yīng)用于佐劑。在1/2期試驗(yàn)中，由大腸桿菌表達(dá)的融合鼠傷寒沙門(mén)氏菌2型鞭毛蛋白（STF2）和H1HA球形結(jié)構(gòu)域的重組蛋白在健康成年人和老年人中誘導(dǎo)了高HI抗體滴度。

       在過(guò)去的十年里，許多研究都集中在通用流感疫苗的開(kāi)發(fā)上，重點(diǎn)是開(kāi)發(fā)針對(duì)流感病毒蛋白保守區(qū)的疫苗策略。對(duì)誘導(dǎo)異源毒株交叉保護(hù)的通用流感佐劑疫苗也在研究中。在最近的一份報(bào)告中，TLR7激動(dòng)劑DSP-0546LP顯示在小鼠中誘導(dǎo)Th1偏向性免疫，如IFN-γ和IgG2c抗體的產(chǎn)生，并增強(qiáng)對(duì)其它H1N1和H3N2亞型病毒的交叉保護(hù)。機(jī)制主要來(lái)源于ADCC作用，而不是交叉中和抗體。ADCC誘導(dǎo)的交叉保護(hù)免疫不僅由TLR7誘導(dǎo)，還可以由TLR9誘導(dǎo)。因此，TLR激動(dòng)劑作為佐劑有望誘導(dǎo)高反應(yīng)原性和交叉免疫反應(yīng)。

       小結(jié)

       隨著我們對(duì)先天免疫發(fā)展的不斷深入理解，各種新佐劑正在被開(kāi)發(fā)作為流感疫苗的佐劑。佐劑有助于提高疫苗對(duì)感染的有效性。不僅增強(qiáng)免疫反應(yīng)，而且擴(kuò)大了對(duì)抗原變體的反應(yīng)范圍。因此，佐劑疫苗似乎更適合對(duì)抗經(jīng)常發(fā)生抗原漂移的流感病毒。佐劑的添加還可以節(jié)省誘導(dǎo)足夠免疫力所需的抗原的劑量，這將允許在流感大流行期間快速分發(fā)疫苗。因此，對(duì)佐劑的進(jìn)一步研究將使我們更深入地了解其功能，并有助于開(kāi)發(fā)更安全、更具免疫原性的佐劑流感疫苗。