| LunaGel?細(xì)胞回收試劑盒
LunaGel?細(xì)胞回收試劑盒是一種經(jīng)過全面優(yōu)化的即用型解決方案，含有一種酶裂解試劑和緩沖液，在37℃下孵育1小時內(nèi)，即可在不破壞細(xì)胞功能的情況下可以從水凝膠中回收活細(xì)胞。
一些實驗室技術(shù)需要將細(xì)胞從三維細(xì)胞培養(yǎng)的水凝膠基質(zhì)中釋放出來，以便進(jìn)行有效的處理和實驗分析。該產(chǎn)品用于從LunaGel?光交聯(lián)細(xì)胞外基質(zhì)中回收有活力的細(xì)胞、球狀細(xì)胞或器官，用于下游應(yīng)用，如再播種、核酸提取、流式細(xì)胞儀、蛋白質(zhì)提取、單細(xì)胞分析等等。
工作原理
在下面的研究中，我們證明了不同硬度的LunaGel?光交聯(lián)細(xì)胞外基質(zhì)的有效消化，以釋放具有高活力的乳腺癌細(xì)胞。
材料和方法
細(xì)胞包封-上皮乳腺癌細(xì)胞（MDA-MB-231）包封
在LunaGel?-牛骨明膠（低剛度試劑盒;凝膠組學(xué)貓。無SKU0005），密度為5×106細(xì)胞/ mL水凝膠和不同的機(jī)械剛度（2，4和6 kPa），在48孔板中遵循LunaGel?細(xì)胞封裝方案。在細(xì)胞恢復(fù)前，在補(bǔ)充有10%（v / v）胎牛的Dulbecco改良鷹培養(yǎng)基中培養(yǎng)細(xì)胞豐富的構(gòu)建體3天。
活死體檢測
在細(xì)胞回收之前，使用熒光素二乙酸酯（FDA）和碘化丙啶（PI）的活/死染色評估LunaGel? ECM中MDA-MB-231細(xì)胞的活力。使用ImageJ對活細(xì)胞（綠色）和死細(xì)胞（紅色）進(jìn)行定量。
將細(xì)胞回收
LunaGel?細(xì)胞回收試劑溶解在5ml細(xì)胞回收緩沖液中，以產(chǎn)生10倍儲備溶液。在細(xì)胞回收當(dāng)天，用恢復(fù)緩沖液稀釋10x細(xì)胞回收溶液并加熱至37°C。除去細(xì)胞培養(yǎng)基后，向每個樣品中加入1ml細(xì)胞回收溶液，并在37°C下孵育30分鐘。通過確定隨時間推移的重量減輕來評估分別具有 2、4 和 6 kPa 彈性模量的含有細(xì)胞的 LunaGel?ECM水凝膠的消化。將含有回收細(xì)胞的所得懸浮液轉(zhuǎn)移到離心管中，用細(xì)胞培養(yǎng)基稀釋，并以250 × g離心至沉淀細(xì)胞。將細(xì)胞重懸于新鮮培養(yǎng)基中，并使用臺盼藍(lán)染色測定細(xì)胞活力。然后將細(xì)胞重新鋪板到24孔板中以評估細(xì)胞附著和增殖。
結(jié)果
通過測定在2°C下與LunaGel細(xì)胞回收溶液孵育4分鐘內(nèi)的水凝膠樣品重量損失，評估分別具有6、30和37 kPa彈性模量的LunaGel?ECM水凝膠的消解。與構(gòu)建體剛度無關(guān)，樣品在25分鐘內(nèi)完全消解（圖 2）。
LunaGel?ECM水凝膠細(xì)胞恢復(fù)前后細(xì)胞活力的定量分析在使用LunaGel?細(xì)胞回收溶液孵育后顯示出出色的細(xì)胞存活率（圖3 a和b）。為了研究回收的細(xì)胞是否仍然起作用，將釋放的細(xì)胞接種在組織培養(yǎng)塑料上并培養(yǎng)過夜。從所有LunaGel?ECM僵硬度組釋放的細(xì)胞很容易附著并顯示出健康MDA-MB-231細(xì)胞的形態(tài)特征（圖3c）。
結(jié)論
LunaGelTM細(xì)胞釋放試劑盒是一種易于使用的現(xiàn)成解決方案，可在不破壞細(xì)胞功能的情況下從水凝膠中回收活細(xì)胞。
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